Nuklein kislota sintezi qattiq fazali sialik amid triglitserid usuli yordamida amalga oshiriladi, bunda DNKning 3' uchi qattiq fazali substratda immobilizatsiya qilinadi va kerakli DNK fragmenti sintezlanmaguncha nukleotidlar 3' dan 5' gacha qo'shiladi. .Bu DNK sintezidan DNK polimeraza qo'llanilishi bilan farq qiladi.
Sintez jarayonida birinchi asosning 3' uchi CPGda immobilizatsiya qilinadi, keyingi asosning 5'-OH di-p-tolil tritil DMT bilan himoyalangan, asosdagi aminokislotalar benzoik kislota va 3' bilan himoyalangan. -OH keyin aminofosfat birikmasi bilan faollashadi.1 asosning 5 5'-OH 1 asosi va keyingi asosning 3'-OH qismi fosfit triglitseridni hosil qiladi, keyin u yod bilan fosfat triglitseridga oksidlanadi, ikkinchi asosdagi himoya 5'-OH tomonidan chiqariladi. keyingi asosni qo'shish orqali dikloroasetik kislota qo'shilishi DM tsikllari va sintezdan so'ng 5′-OH ustidagi himoyalovchi kuchsiz kislota bilan chiqariladi Fragment konsentrlangan ammoniy gidroksid bilan qattiq qatrondan ajratiladi, himoya qiluvchi asosdan chiqariladi. qizdirilganda konsentrlangan ammoniy gidroksid bilan ammoniy gidroksid chiqariladi, fragment vakuumda quritiladi va nuklein kislota suyuq xromatografiya yoki PAGE orqali tozalanadi.
Oligo sintezining bosqichlari
Blokdan chiqarish
The5-sonli DMT himoya guruhi TCA eritmasini qo'shish orqali chiqariladi.
Faollashtirish
Aktivatorni oligonükleotid monomer bilan aralashtirish faol oligonukleotid monomer oraliq mahsulotini hosil qiladi.
Ulanish
5-terminal gidroksil guruhi beqaror fosfit triglitserid aloqasini hosil qilish uchun generativ kondensatsiyaga qarshi reaksiyada faol oligonükleotid oraliq mahsuloti bilan reaksiyaga kirishadi.
Qopqoqlash
Qopqoqlash vositasining qo'shilishi kondensatsiya reaktsiyasida ishtirok etmaydigan ortiqcha gidroksil guruhlari bilan atsetilatsiyani yopish reaktsiyasini amalga oshiradi.
Oksidlanish
Tarkibida suv boʻlgan yod eritmasi qoʻshilishi barqaror fosfor kislotasi triglitserid bogʻlarini hosil qilish uchun oksidlanish orqali beqaror fosfit bogʻlari bilan reaksiyaga kirishadi.
Siyanoetilning parchalanishi
Sintezdan so'ng nuklein kislotasi mahsuloti, siyanetil guruhini fosfat triglitserid aloqasidan olib tashlash uchun DEA eritmasi qo'shilishi bilan.
Yirtilgan va himoyadan chiqarish
Nuklein kislota bo'laklari konsentrlangan ammoniy gidroksid eritmasini qo'shish orqali qattiq faza tashuvchisidan ajratiladi va keyin asoslarning vodorod aloqalaridan himoya guruhlarini olib tashlash uchun isitiladi.
Etkazib berish vaqti: 21-noyabr-2022