DNK sintezining asosiy printsipi

Kimyoviy DNK sintezi qattiq fazali sintez strategiyasi va fosforamidit kimyosiga asoslangan.Biologik DNK sintezidan farqli o'laroq, kimyoviy DNK sintezidagi material 1-rasmda ko'rsatilganidek, DMT (4, 4-dimetoksitritil) va fosforamidit bilan o'zgartirilgan deoksiriboksiddir.Oligo sintez ustuni), ya'ni CPG (boshqariladigan gözenekli shisha) va PS (polistirol) va butun sintezDNK/RNK sintezatori, bizning asosiy uskunamiz bo'lgan turli xil modellarga ega: HY yagona kanalli sintezator, HY-12, HY-192 va boshqalar, sintez yo'nalishi 3' dan 5' gacha va nukleotid bitta orqali qattiq tayanchga kiritiladi. sintez sikli.Odatda sintez sikli to'rt bosqichni o'z ichiga oladi, himoya qilish, ulash, yopish va oksidlanish (2-rasm).Deprotection qattiq tayanchdagi DMT guruhini yoki oldingi nukleoziddagi 5' gidroksil guruhini olib tashlash uchun o'rnatiladi, himoya qilish reaktivi sifatida diklorometan tarkibidagi 3% trikloroatsetik kislota ishlatiladi.Keyin fosforamidit bilan o'zgartirilgan dezoksiriboksidid faollashtiruvchi, ya'ni 5-etiotetrazol yoki 4,5-disiyanoimidazol yordamida gidroksil guruhini ta'sir qilishiga ruxsat berildi va fosfitetriester (III) hosil qildi va Ulanish bosqichini amalga oshirdi.Qopqoqlash bosqichi ulanish bosqichida reaksiyaga kirishmagan gidroksil guruhini blokirovka qilish, istalmagan nuqsonlar ketma-ketligini minimallashtirish uchun amalga oshiriladi.Nihoyat, beqaror fosfitetriester (III) piridin tarkibida oksidlovchi sifatida yod bilan kimyoviy barqaror fosforiester (V) ga oksidlanadi.

Sintezlangan DNK qattiq tayanchdan aminoliz orqali ajralishi mumkin, fosforisterdagi 2-siyanoetil bilan himoyalangan guruh va nukleobazadagi amid bir vaqtning o'zida parchalanadi, tokchalardagi sintez plitalari va sintez ustunlari to'g'ridan-to'g'ri reaksiya kamerasiga joylashtiriladi. ningHimoyadan chiqarish uskunasi.Xom DNK talabga binoan HPLC, elektroforez va OPC tomonidan tayyorlanishi mumkin, biz sizga ham taqdim eta olamizTozalash uskunalariPost-qayta ishlash uchun.